Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日趋扩展

从第一次出新现口内化脓性化学反应到出新现1型式高血压诊疗病因的的发展赴援在儿童一时期就有极好的揭示，多个口内化脓性化学反应特征性的儿童当出新处70%在人体内叠加后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一人口比例减小到84%。比起之下，分之二诊疗1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的复发机制还未给予应有的研究者。

越来越多的人开始采用依此系统来度量1型式高血压的的发展：形态在出新现多种口内化脓性化学反应时进入第1阶段，出新现血糖精神状态时进入第2阶段，出新现病因时进入第3阶段。一些多发口内化脓性化学反应特征性的形态，在1期和2期，的发展较很慢，并发展为复发的1型式高血压。我们先前揭示了一第三组在首次样品到多种口内化脓性化学反应样本后至少10年无高血压的较快的发展者，这第三组病人人数少，但外观上非常明确。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T巨噬细胞化学反应将在的发展加速的病人当中前提不假定，但在近期复发和长期假定的高血压病人当中很容易样品到。这有可能证明，与的发展病人比起，这些病人化脓性化学反应将的缓冲增强。

一一时期研究者证明，尽管缓冲性T巨噬细胞(Treg)量长时间，但高血压病人假定一些功能缺陷，其当中以外对IL-2的化学反应将能力降低。此外，高血压病人当中的震荡将CD4+T巨噬细胞有可能对缓冲更加具抵抗性，展示出新为震荡将T巨噬细胞的依赖性向西移动，其本质转化成的Treg和形体外转化成的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2化学反应将向西移动。本研究者的目标是揭示了CD4+缓冲性T巨噬细胞(Treg)在领头极加速的发展者当中的外观上，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的侧向研究者，在21岁以下患病的病人亲属当中检查1型式高血压的小心因素。我们先前揭示了长期加速的发展者的外观上，他们保持多重口内化脓性化学反应特征性超过10年，但未出新现高血压的诊疗病因，很慢性或非性虐待化脓性。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量人体内样本的加速的发展者纳入T和B巨噬细胞功能生物信息学。在现阶段的研究者当中，8名很慢的发展者(SP第三组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内化脓性化学反应特征性。所有的行动者都受制于1型式高血压的发展的1期，尽管一些人随后失去了口内化脓性化学反应对某些特异性的特征性化学反应将，然而，一名病人已经受制于2期至少6年，但未出新现诊疗病因，一名病人被诊断为高血压，该人会72岁，在捕获实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据生物信息学当中对该遗传物质进行了分开生物信息学。转化外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多值流式巨噬细胞精和T巨噬细胞依赖性试验生物信息学遗传物质当中Treg的频赴援、遗传式和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和复归)进行无监督聚类生物信息学，生物信息学Treg遗传式。

结果：与健康遗传物质比起，来自很慢的发展形体的清醒CD4+T巨噬细胞的监督聚类看出新，激已逝的清醒CD4+ Treg频赴援减小，与抑制作用诱发的TNFR相关亚基(GITR)解读减小有关。一名HbA1c上升的病人与的发展加速者和也就是说的相异第三组比起，Treg谱并不相同。功能数据得出新结论，与健康遗传物质比起，来自加速的发展形体的Treg介导的CD4+震荡将T巨噬细胞依赖性明显损坏。展示出新为对震荡将CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的依赖性减小。

绘出新1 深入的遗传式生物信息学看出新，CD4+Treg冠状病毒在很慢的发展队列当中减小。由FlowSOM填充的Treg寝室，聚集在来自所有遗传物质的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出新物解读确认出新10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个并不相同Treg标示出新填充的10个元簇的MST。每个路由器代表一个战斗群(100个战斗群)，更加大的元战斗群(10个元战斗群)在路由器第三组周围上色。每个路由器当中的饼绘出新对此单个标示出新的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出新，以看出新整形体标示出新解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充绘出新，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)正因如此丰度为每个metacluster装中央线绘出新(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。橙色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配表示法秩核查。此键适用于绘出新形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出新2 采用CITRUS的预测模型式证实，Treg频赴援的减小是的发展加速的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘生物信息学(g-k)相对SP行动者和也就是说的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的权威性绘出新。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行转化，演示FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及遗传物质SP 606(橙色)当中CD25+ cd127的频赴援综合绘出新。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外开集的装中央线绘出新;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度纹理，记号引人注意的簇被识别为SP和HD队列之间的并不相同。(j)装中央线绘出新看出新了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组当中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的正因如此丰度(人口比例)。(k)直方绘出新看出新每个簇的遗传式(白色)和Treg标示出新正因如此解读与取材解读(黄色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。取材与所有其他簇当中标示出新的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配表示法秩核查

绘出新3 与健康献血者比起，的发展加速者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标示出新的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热绘出新(sp606不以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读联结，看出新直方绘出新(c)和综合绘出新(d)。Wilcoxon匹配表示法秩和核查，p< 0.07(橙色)所有遗传物质以外，p< 0.05(黄色)遗传物质SP 606和也就是说的HD不以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)联结，看出新直方绘出新(e)和综合绘出新(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配表示法秩核查

绘出新4 来自加速的发展的CD4+ treg巨噬细胞控制震荡将CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP第三组用黄色的中央线和左上角对此，HD第三组用黑色的中央线和左上角对此，橙色的中央线/左上角对此遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被标示出新为CFSE, Treg按捕捉到的人口比例化学反应将物。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3过后进行流式巨噬细胞精样品。(a-d)与CD4+应将答者正因如此应将的treg培植(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。采用特征性相异(激已逝的拥护将巨噬细胞另有treg)计算出来依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

绘出新5 震荡将CD4+T巨噬细胞对加速的发展的T巨噬细胞再生的依赖性更加尖锐。SP第三组用黄色的中央线和左上角对此，HD第三组用黑色的中央线和左上角对此，橙色的中央线/左上角对此遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标示出新，treg按捕捉到的人口比例化学反应将物。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3过后进行流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因子生物信息学。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者都由培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

论断：我们推断的论断是，来自加速的发展子的再生清醒CD4+Treg在GITR解读当中给予了扩展和丰沛，务实了进一步研究者Treg在1型式高血压风险形态当中的异质性的必要性。

原意出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28